HPLC (høypresisjonsvæskekromatografi)

HPLC er en mye benytta instrumentell kromatografimetode. Metoden omtales normalt bare som HPLC, fra engelsk High Performance Liquid Chromatography.

Enkel kolonnekromatografi kan utføres uten avansert instrumentering, men denne metoden gir dårlig separasjon og krever mye manuelt arbeid. HPLC er en forbedret utgave av tradisjonell kolonnekromatografi. HPLC har fordelen at metoden er instrumentell og datastyrt, og instrumentet kan fylles med en stor mengde prøver som så analyseres automatisk, for eksempel gjennom natten eller over helga.

HPLC-instrumentet består grovt sett av mobilfasereservoar, luftfjerner, høytrykkspumpe, injeksjonsautomat, separasjonskolonne (stasjonærfasen), en eller flere detektorer og datamaskin med skriver. Datamaskinen vil normalt både styre HPLC-instrumentet og behandle resultatene fra analysene og vise disse i en resultattabell.

Kolonnen der selve separasjonen foregår er pakket med svært små partikler, ofte 3 eller 5 mikrometer (0,003-0,005 millimeter) i diameter for å få god separasjon. En høytrykkspumpe må derfor benyttes for å pumpe væske (mobilfase) gjennom systemet. Det brukes små mengder væske, gjerne 0,5 til 5 milliliter i minuttet, men trykket kan være opptil 2-300 atmosfærers trykk. Det høye trykket stiller store krav til kvaliteten på slanger og overganger mellom de ulike delene i instrumentet.

Alle separasjonsprinsippene (adsorpsjon, fordeling, ionebytting og eksklusjon) benyttes i HPLC. Det finnes et stort antall forskjellige kolonner som varierer med hensyn til dimensjoner, pakkemateriale, type stasjonær fase osv. Indre diameter og lengde på en vanlig analytisk kolonne er vanligvis i området 2–5 mm diameter og 3–25 cm lengde. Detektorene er blant annet basert på måling av UV-absorpsjon, brytningsindeks, lysspredning og fluorescens. Måling av UV-absorpsjon med et spektrometer med en gjennomstrømningskyvette er mest benyttet. I senere tid er massespektrometre populære som detektorer til HPLC, men disse dettektorene koster ofte mye mer enn selve HPLC-instrumentet og derfor er de lite brukt.