I Florida, nær munningen av St. Johns River, lengst nordøst i delstaten; 805 600 innb. (2007). Danner en større byregion (metropolitan area) med 1 300 800 innb. (2007). Statens fremste industri-, finans-, handels- og kommunikasjonssenter. Produksjon av tremasse, droger, sigarer og maskiner. Havneby med eksport av bl.a. frukt og grønnsaker; skipsverft, marineflystasjon og andre militære installasjoner. Stor turisttrafikk. Mange utdanningsinstitusjoner, bl.a. Jacksonville University (grunnlagt 1934), og University of North Florida (1972). Eget NFL fotballag, The Jaguars. I nærheten er Fort Caroline National Monument til minne om en tidlig fransk hugenottkoloni (1564).
Byen ble grunnlagt 1822 og oppkalt etter president Andrew Jackson. Under borgerkrigen ble størstedelen av byen ødelagt, men anlegg av en god havn og jernbaner gav rask vekst fra slutten av 1800-tallet. En byutvidelse 1968 gjorde Jacksonville til en av USAs største byer etter areal (2178 km2). Viktig havn, både sivilt og militært; under Golfkrigen (1990–91) viktig skipningshavn for de militære styrker; to marineflybaser i nærheten. Bystatus 1832.